一、樣本采集的原則

1.影響檢測(cè)結(jié)果的因素

（1）樣本是否新鮮無污染。

（2）選擇合適的樣本及樣本數(shù)量。（例：千頭豬場抗體評(píng)估需30份血清）

（3）注意生物安全防范，防止交叉污染。  

（4）清晰的背景信息，避免活疫苗免疫后檢測(cè)。

2. 基本原則

（1）疾病動(dòng)態(tài)過程：藍(lán)耳病的病毒血癥期短，血液中難捕捉病毒。病毒血癥期過后須選擇更敏感樣本（如組織、拭子）。  

（2）樣品采集要明確檢測(cè)目的，是病毒分離、診斷還是測(cè)序；操作需規(guī)范，避免交叉污染；背景信息準(zhǔn)確性，需記錄免疫史、采樣時(shí)間等關(guān)鍵信息。  

（3）注意樣本保存與運(yùn)輸，藍(lán)耳病病毒易降解，需冷凍保存運(yùn)輸。

（4）樣品處理與檢測(cè)流程須符合標(biāo)準(zhǔn)，提取和擴(kuò)增試劑注意匹配。  

二、樣本采集、處理與保存

1. 樣本采集

（1）血液樣本：通過前腔靜脈采血（在兩前肢與氣管交匯處針頭偏氣管15°進(jìn)針）或尾靜脈采血（尾骨間凹陷處15°-30°進(jìn)針深12mm）。血液低速離心分離血清。血清狀態(tài)分為七個(gè)等級(jí)：一級(jí)為標(biāo)準(zhǔn)樣本，血清呈半透明、淡黃色，無膠凍狀。三級(jí)以上溶血不能用于檢測(cè)，會(huì)造成假陽性。

（2）拭子樣本：包括咽拭子（采扁桃體擦拭液）、鼻拭子（雙鼻孔各轉(zhuǎn)3圈）、肛拭子（棉簽入直腸2-3cm）。

（3）唾液樣本：多應(yīng)用于大欄采樣。采樣時(shí)間一般選擇采食前/后2小時(shí)，咬繩時(shí)間控制在30分鐘，須添加核酸保護(hù)劑防降解。

（4）組織液樣本：主要研究樣本為豬扁桃體口腔擦拭液和舌尖液。當(dāng)其檢測(cè)為陰性時(shí)，其對(duì)應(yīng)的同窩活仔豬群實(shí)際未感染PRRSV的概率極高。

2.樣本處理

混樣規(guī)則：組織≤5份/混樣；拭子≤3份/混樣；異常樣本單獨(dú)檢測(cè)。

拭子類：使樣本浸入生理鹽水旋渦震蕩完全。

糞便樣本：低速離心去除雜質(zhì)，取上清檢測(cè)。  

干燥樣本：適量加生理鹽水，控制量在能夠滿足復(fù)檢即可。

組織樣本：充分勻漿后離心。

3.樣本保存

血清：20℃以下穩(wěn)定（30℃以上降解快）。 

口腔液、糞便：需冷凍（-80℃長期最佳）?？谇灰悍磸?fù)凍融易降解。

三、藍(lán)耳檢測(cè)數(shù)據(jù)分享

1. 監(jiān)測(cè)方案

母豬場：季度監(jiān)測(cè)（4次/年），30份血清/次；

育肥場：1000頭抽10份，2000頭抽20份血清；

抗體合格標(biāo)準(zhǔn)：陽性率≥90%，離散度<40%。

抗原的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)基本上是采集母豬的這個(gè)口/鼻/肛拭子以及睪丸液進(jìn)行監(jiān)測(cè)。

2.試劑盒選擇

不同廠家試劑盒檢測(cè)數(shù)據(jù)的離散度差異大，有的檢測(cè)離散度低于40%，有的高于40%，不能一定說明豬養(yǎng)的好或不好，要根據(jù)自己生產(chǎn)的實(shí)際情況注意甄別。

3.抗原各個(gè)樣本的檢出率

檢出率最高的是拭子，口/鼻/肛的拭子一起采完之后完成檢測(cè)，沒有進(jìn)一步細(xì)化區(qū)分檢測(cè)率。檢出率第二是血液，第三是睪丸液。      

總結(jié)

1. 樣品采集須遵循選擇敏感樣本、明確檢測(cè)目的、規(guī)范操作、背景清晰等原則。

2. 應(yīng)用科學(xué)的方法完成樣本的采集和處理，確保低溫保存和運(yùn)輸，有效的的樣本是檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確的基礎(chǔ)。  

3.制定合理的監(jiān)測(cè)方案，注意對(duì)試劑盒的甄別，根據(jù)本場生產(chǎn)情況客觀理性解讀檢測(cè)數(shù)據(jù)。

會(huì)議筆記由維科控股集團(tuán)股份有限公司石薇琳記錄整理。